尊龙凯时

單細(xì)胞全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組

  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
  • 樣本要求
  • FAQ

尊龙凯时單細(xì)胞全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序基于10x Genomics和Kinnex Single Cell串聯(lián)技術(shù),通過二代測(cè)序+三代測(cè)序聯(lián)用方法,不僅可以獲得更加精細(xì)的細(xì)胞聚類、細(xì)胞注釋,而且還可以挖掘到在發(fā)育生物學(xué)等研究中非要重要的可變剪切、融合基因、RNA水平突變等信息。

         
樣品要求
細(xì)胞分離由合作方或安諾完成單細(xì)胞懸浮液的制備
樣品類型活體新鮮完整細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液,凍存的細(xì)胞懸浮液,不適于經(jīng)固定、染色等處理的樣本
樣品總量總量>6*105個(gè),同一個(gè)細(xì)胞平行準(zhǔn)備2份(1份質(zhì)檢,1份實(shí)驗(yàn))
樣品濃度700-1200個(gè)/μl
樣品質(zhì)量細(xì)胞不能成團(tuán),少碎片,活性>85%,細(xì)胞直徑<30 μm,不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑及非細(xì)胞的核酸分子
細(xì)胞凍存液保存分裝保存于凍存液中,細(xì)胞凍存液:DMEM+20%FBS+10%DMSO
凍存液細(xì)胞濃度100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞/ml,每1 ml分裝至1個(gè)凍存管
               
  • Q:?jiǎn)渭?xì)胞全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)流程
    A:
    前部分實(shí)驗(yàn)與10x Genomics單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組一致,通過微流控平臺(tái)將帶有條形碼和引物的凝膠珠與單個(gè)細(xì)胞包裹在油滴中。在每個(gè)GEM中,凝膠珠溶解,細(xì)胞裂解釋放mRNA,通過逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生用于帶Barcode和UMI信息的cDNA。然后將cDNA一分為二,同時(shí)進(jìn)行二代建庫(kù)測(cè)序和Kinnex Single Cell串聯(lián)三代建庫(kù)測(cè)序。
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